一、课题来源与背景：本课题“尘螨Der Ⅱ融合蛋白靶向双功能纳米疫苗免疫治疗的实验研究”获国家自然科学青年基金项目资助（No.31400786），2015.1- 2017.12。过敏性疾病是临床上的常见病、多发病，我国有2亿多人口患有过敏性疾病，以及在众多的过敏原中尘螨是最主要过敏原，其阳性率约70-80%。过敏原特异性免疫治疗（SIT）是目前WHO唯一认可的对因治疗方法。本课题组在前期（2010-2014年）对粉尘螨基因组和转录组的大规模测序发现尘螨体内存在100多种细菌，其中大部分为肠杆菌，并证实商品化尘螨疫苗中含有肠杆菌FimH蛋白。最新研究表明肠道细菌具有重要的免疫调节潜能，与过敏性疾病的发生发展密切相关。近年研究发现肠杆菌FimH蛋白是Toll样受体4（TLR4）的重要配体。Toll样受体4信号不仅可以诱生Th1细胞，而且可以诱生Treg细胞，取决于免疫微环境，在免疫活化或免疫耐受中起重要作用；但尘螨疫苗增强机体固有免疫的作用机理尚不清楚，寻找新一代高效尘螨疫苗是该领域的研究热点。

    二、研究目的与意义：尘螨疫苗SIT的治疗原则是通过抑制过敏性疾病患者Th2细胞介导的特异性免疫反应并且重建患者的免疫平衡，但仍存在治疗疗程长、患者依从性差等不足之处。此外，在尘螨疫苗SIT临床应用中发现：接受尘螨疫苗SIT的患者上呼吸道和肺部感染及其诱发的哮喘急性加重的发生率较治疗前显著下降，这与患者的固有免疫系统的增强密切相关，尘螨疫苗是否对呼吸道固有免疫起调节作用？这些问题的解答对于揭示SIT对呼吸道固有免疫的调节机制具有十分重要的意义。

    三、主要论点与论据和创新性：本项目通过纳米聚合物合成技术，成功合成了4种新型纳米聚合物PLGA-b-PEG、PLGA、PLA-PEG及壳聚糖，且通过实验比较分析4种纳米材料的表征和功能，筛选出更适合做过敏原疫苗药物载体的聚合物为PLGA-b-PEG。通过基因工程技术将尘螨两种主要过敏原Der f 1和Der p 2基因合成融合基因，并克隆、表达、纯化该融合蛋白Der Ⅱ及进行其免疫学鉴定，进一步通过纳米疫苗制备技术用PLGA-b-PEG纳米聚合物包载Der Ⅱ融合蛋白制备PLGA-b-PEG-DerⅡ靶向纳米疫苗。通过哮喘、鼻炎和过敏性眼结膜炎等过敏性疾病动物模型和细胞实验，观察过敏原纳米疫苗PLGA-b-PEG-Der Ⅱ特异性免疫治疗（SIT）疗效和机制。结果显示纳米尘螨过敏原疫苗PLGA-b-PEG-Der Ⅱ能显著提高IL-10、TGF-β1等免疫耐受型细胞因子和Treg，从而达到提高过敏原SIT的疗效，降低免疫治疗的风险和缩短治疗疗程，为临床哮喘等过敏性疾病的SIT提供新方法。本项目进一步研究发现尘螨疫苗免疫（SIT）治疗除调节特异性免疫应答外，还能上调呼吸道上皮细胞HBD-2的表达，增强气道HBD-2介导的固有免疫应答。研究显示尘螨疫苗SIT能上调哮喘小鼠Th1型反应、抑制Th2型反应，减轻哮喘小鼠的症状；同时能增强哮喘小鼠肺上皮细胞可上调β防御素(mBD)-3（HBD-2同系物）的表达，并增加哮喘小鼠对铜绿假单胞菌肺部感染的抵抗力，能激活固有免疫；亦能在转录水平增加HBD-2的表达。故提出“尘螨疫苗双功能”假说，即：尘螨过敏原疫苗特异性免疫治疗除调节特异性免疫（Th1/Th2平衡）外，还可增强机体的固有免疫。为尘螨疫苗在临床过敏性疾病（如哮喘、过敏性鼻炎等）的治疗上提供了新的理论依据。

    四、社会经济效益，存在的问题：

    1、本研究显示纳米尘螨过敏原疫苗能显著提高IL-10、TGF-β1等免疫耐受型细胞因子和Treg，从而达到提高过敏原SIT的疗效，降低免疫治疗的风险和缩短治疗疗程，为临床哮喘等过敏性疾病的SIT提供新方法。

    2、首次提出并证实“尘螨疫苗双功能”假说，即：尘螨疫苗免疫治疗（SIT）除调节特异性免疫应答（Th1/Th2平衡）外，还能上调呼吸道上皮细胞HBD-2的表达，增强气道HBD-2介导的固有免疫应答。为尘螨疫苗在临床过敏性疾病（如哮喘、过敏性鼻炎等）的治疗上提供了新的理论依据。