本研究主要的目的是通过不同途径包括TCR ζ基因转导T细胞以及联合不同免疫刺激分子的诱导等方法恢复AML病人T细胞中TCR ζ链的表达水平，分析其功能变化，并通过基因表达芯片分析恢复TCR ζ链表达、活化前后T细胞的基因谱变化特点，进而了解TCR ζ缺陷相关的分子机制。

   主要研究成果包括有:

   （1）我们首先分析了AML病人T细胞信号通路中TCR ζ链及其相关信号分子CD3-gamma,,CD3-delta,CD3-epsilon等相关基因的表达水平情况，结果发现各基因的表达水平均比健康人低，进一步在蛋白水平上通过流式细胞术对初发的AML病例CD3+/TCR ζ+双阳性T细胞的表达情况进行分析，同样显示AML病人外周血CD3+/TCR ζ+双阳性T细胞的表达水平比健康人低，提示AML病人存在明显的T细胞免疫缺陷。

   （2）本研究进一步分析了TCR ζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1、 Zap-70 和FcεR Iγ等相关基因的表达水平特点，发现AML病人T细胞中Elf-1基因的表达水平明显低于健康人，而TCR ζ的互补链FcεR Iγ基因的表达水平则明显高于健康人，提示TCR ζ的调控网络同样存在缺陷。

   （3）利用已构建的TCRζ表达载体 (TCRζ-IRES2-EGFP)转导AML病人T细胞，证明上调TCR ζ基因后病人T细胞IL-2，IFN-γ等细胞因子的分泌水平增加。

   （4）联合不同免疫刺激分子（IL-2, IL-7和IL-12）诱导AML病人T细胞可在一定程度上上调并恢复TCRζ链RNA和蛋白水平及其相关基因的表达，提高IFN-γ分泌水平以及增强细胞毒性作用，本研究还通过颗粒酶和钙流检测进一步证实经联合不同免疫刺激分子诱导后T细胞的活化增殖功能明显增强，其中，联合IL-7诱导后病人Ｔ细胞功能恢复情况优于其他组。这些结果均提示通过TCRζ基因转导或联合细胞因子诱导均能使AML病人T细胞活化功能得到一定程度上的提高或恢复。

   （5）蛋白定量芯片检测TCRζ表达载体转导AML病人T细胞和经联合不同免疫刺激分子诱导AML病人T细胞后的培养上清，结果显示：经转导TCRζ表达载体后和经联合不同免疫刺激分子诱导后其IL-2，IL-4, IFN-γ，TNF-α 以及 GM-CSF等多种因子的分泌水平均有不同程度的增加，提示T细胞的活化增殖功能明显增强。但经联合不同免疫刺激分子组存在明显的个体差异，可能与AML的类型有关或与TCRζ链的自身调控因素有关。

   （6）我们还在此基础上进一步对诱导前后的TCR谱系进行了克隆性分析，结果提示，联合IL-7细胞因子诱导后T细胞在个别亚家族增殖上有所增加，但T细胞的克隆性不发生改变，这结果也进一步证明了IL-7同样是促进T细胞增殖，而不改变T细胞的克隆性。本研究在针对AML病人T细胞研究的同时，我们还进一步利用我们已建立的方法对CML、淋巴瘤和CLL等病人T细胞进行TCR ζ基因及相关基因的研究，并同时在CML病人T细胞中实现了TCRζ基因转导和上调T细胞功能的作用。

   总之，本研究率先在国内外提供通过两种途径包括TCRζ基因转导和体外细胞因子诱导前后AML病人T细胞信号通路TCRζ链和相关基因的表达特点，及其T细胞的功能恢复情况，并为进一步了解AML病人T细胞信号通路相关分子免疫机制提供新资料，也为临床设计更简易有效T细胞免疫治疗治疗策略提供参考资料和依据。