| 成果名称: | 基于酸甘化阴理论乌梅喷雾剂促进唾液腺细胞自噬防治放射性口干症机制研究 |
| 完成单位: | 广州中医药大学 |
| 主要人员: | 陈佩仪、李春、戴振晖、邱圣红、陈惠超、黎晖、李玉洁、谢秀荣 |
| 介绍: | 一、课题来源与背景：目前临床放疗除了尽量减少对唾液腺的损伤，仅能做出相应的对症治疗，例如在放疗中采用氨磷汀(Amifostine)作为细胞保护剂，放疗结束后采用拟胆碱药、人工唾液等作对症治疗。在放疗中和放疗后口服毛果芸香碱，能预防或减轻头颈部肿瘤放疗所致口干症状，但用药超过放疗后 3个月则无意义。匹罗卡品是唯一被美国食品药品管理局批准的用于治疗放射性口干症和干燥综合征的唾液腺分泌刺激剂，给予匹罗卡品5mg-10mg 每天 3 次，口腔干燥的改善和唾液分泌方面与空白对照有统计学意义，但是常见副作用是出汗、恶心、鼻炎、腹泻、寒战、脸红、尿频、眩晕和虚弱。其中最常见的副作用是出汗（中医学认为，出汗、腹泻、尿频等均为阴液丢失，这对于放疗后口干症患者就是雪上加霜），因此许多患者还因为其副作用而放弃了该种治疗。 中医药口服研究方面颜博发现，放疗早期患者通过饮用养阴清咽饮可延缓放射性口干症的发生，增加唾液流速，但对唾液腺有无保护作用未阐明；国外Avani等在患者唾液腺前方注射生物可降解水凝胶，降低放疗射线对唾液腺的损伤。本研究成果取材容易，价格低廉，使用简单，副作用少，是我国治疗口干症发展新药的趋势。今后在乌梅成分干预方面作进一步研究。 二、研究目的与意义： （1）建立放射性涎腺损伤大鼠模型，用高、中、低浓度乌梅喷雾剂为干预处理。（2）以生理盐水为阴性对照，以匹罗卡品为阳性对照，用高浓度乌梅喷雾剂为干预处理，主要检测水通道蛋白AQP1/5的表达。（3）以生理盐水为阴性对照，以匹罗卡品为阳性对照，用高浓度乌梅喷雾剂为干预处理，主要利用Western-blot、PT-PCR检测自噬相关蛋白ATG5/LC3、凋亡相关蛋白Beclin-1/Bcl-2表达。 三、主要论点与论据：放射性口干症的基础研究比较深入，已经探索了转基因、干细胞等治疗方法。与本研究相关文献主要有 ①在放射性损伤早期，唾液腺细胞形态与数目基本正常，但是细胞自噬功能受损，细胞膜水通道蛋白表达异常，导致水分泌障碍而引起唾液流率显著减少，所以如果抑制自噬功能，则极其显著地抑制水分泌，出现更为严重的水分泌障碍，唾液流率可能减少 45%；那么如果增强细胞自噬功能，则可能显著改善水分泌障碍。②在放射性损伤的第二阶段，凋亡与自噬的反相增强现象提示，如果自噬功能减弱（如使用自噬抑制剂或者Beclin1/ATG5基因敲除后），细胞内氧自由基等有害物质堆积，导致细胞凋亡增加；如果增强唾液腺细胞的自噬功能，则可能减少细胞凋亡，改善放射性口干症。 四、创见与创新：目基于酸甘化阴的中医理论，提出了“乌梅可能通过腺泡细胞的自噬功能促进水通道蛋白表达和减少腺泡细胞凋亡来防治放射性口干症”的假说并得到初步证实。首次体内成功建立了大鼠颌下腺细胞放疗损伤模型，使用乌梅喷雾剂干预2周后，发现乌梅喷雾剂可以促进AQP1和AQP5基因高表达，调节颌下腺组织水分泌和水跨膜运转功能，提高放射性唾液腺损伤大鼠的生存质量，能有效修复大鼠颌下腺放射性损伤后的细胞形态，初步研究表明乌梅局部用药较全身用药（口服）效果更佳，该喷雾剂对大鼠唾液腺体内影响，具有比较充分的理论与实验基础，有较强的创新意义和推广应用价值。 五、社会经济效益，存在的问题：本研究的结果为放疗后口干症患者的临床应用提供了理论基础，同时也为其他口干人群提供了对症治疗手段。目前该喷雾剂已在临床推广使用，使用的病种包括透析患者口干症、糖尿病患者口干症、长时间（4小时以上）术后口干症、老年患者口干症，初步数据显示效果良好，已发表应用性论文3篇。基于本研究的启发，现正在申请发明专利1项。计划做成专利产品推广并解决其他疾病引起的口干症问题。因本研究主要材料乌梅和甘草，取材廉价、资源丰富，从目前的初步研究显示其副作用少。从副作用与西药匹罗卡品相比凸显优势，从价格与人工唾液相比较更具有价格优势。 六、成果简介：本成果基于酸甘化阴的中医理论，提出了“乌梅喷雾剂可能通过腺泡细胞的自噬功能促进水通道蛋白表达和减少腺泡细胞凋亡来防治放射性口干症”的假说。拟制作经典的放射性涎腺损伤大鼠模型，以匹罗卡品和生理盐水作阳性对照，用高、中、低浓度乌梅喷雾剂处理，分时间点收集唾液，测定唾液量和流率等以检测腺体功能；摘取腺体，用HE染色、免疫组化等形态学方法和Western-blotting、荧光定量PCR等技术检测自噬相关蛋白ATG5/LC3、凋亡相关蛋白Beclin-1/Bcl-2和水通道蛋白AQP1/5的表达，以验证理论假说，为临床应用打下基础。 该项目建立了大鼠在体内放射性损伤模型，使用乌梅喷雾剂干预2周后，发现乌梅喷雾剂可以促进AQP1和AQP5基因高表达，调节颌下腺组织水分泌和水跨膜运转功能，提高放射性唾液腺损伤大鼠的生存质量，能有效修复大鼠颌下腺放射性损伤后的细胞形态，但就目前研究数据并未能表明乌梅喷雾剂对放射性唾液腺损伤细胞自噬活性存在影响。该项目还发现局部用药较全身用药效果更佳，已在临床小范围推广试用乌梅喷雾剂，初步显示效果良好。 |
| 批准登记号: | 粤科成登（2）字【2018】0285 |
| 登记日期: | 2018-07-02 |
| 研究起止时间: | 2015.01 至2018.01 |
| 所属行业: | 卫生和社会工作 |
| 所属高新技术类别: | |
| 评价单位名称: | 广东省自然科学基金委员会管理办公室 |
| 评价日期: | 2018.01.24 |
