本课题来源于国家自然科学基金，旨在阐明兰瑞肽治疗不敏感的分子机制，为GH腺瘤治疗提理论依据。垂体源性肢端肥大症除激素分泌过多和肿瘤压迫引起损害外，易产生心血管、呼吸和代谢系统并发症，严重影响生存质量。我们前期研究发现部分垂体生长激素腺瘤病人对兰瑞肽治疗不敏感。

   本研究拟观察兰瑞肽处理后GH腺瘤组织、GH腺瘤原代培养细胞和GH3细胞系中IGF1、IGFBP3和ALS在转录和翻译水平的变化；观察miR-524-5p水平变化对原代培养细胞和GH3细胞系细胞增殖、凋亡的影响；明确IGF1、IGFBP3和ALS表达变化与miR-524-5p变化之间的关系；明确miR-524-5p是否通过IGF1、IGFBP3和ALS调节MAPK活性并通过何种通路（ERK?/p38?/JNK?）激活凋亡通路。 经过研究实验，本课题组已通过Transwell共培养方法成功建立体外GH-IGF-1分泌轴，这对于肢端肥大症的体外研究具有重大意义；通过构建miR-524-5p质粒载体，最终包装目的基因的病毒，成功转染到GH原代细胞中，为后续的实验打下坚固基础；我们使用转染了miR-524-5p的原代细胞与肝细胞共培养，在兰瑞肽作用下，检测其对肝细胞所产生的下游蛋白（IGF-1、IGF-BP3、IGF-ALS）的影响，进而比较未转染目的基因的原代细胞对肝细胞分泌的下游蛋白的作用，以此明确miR-524-5p的过表达对于肿瘤细胞的耐药性的影响；实验结果显示，在添加了兰瑞肽的条件下，对比未转染的GH原代细胞，转染了目的基因的细胞对肝细胞所产生的下游蛋白的促进作用并未明显减弱，说明了miR-524-5p的过表达使得肿瘤细胞产生了一定的耐药性。进一步用转染了目的基因的原代细胞与未转染的原代细胞作对比，qRTF-PCR结果显示，实验组的ERK1及ERK2的转录水平较对照组的上调，这说明了miR-524-5p的过表达可能通过激活MAPK/ERK通路使得肿瘤细胞获得耐药特性。对ERK蛋白的研究需要补充相关的信号通路抑制实验及其他相关靶向蛋白的分析研究，深入探讨miR-524-5p与MAPK/ERK通路的潜在调节关系，为兰瑞肽治疗耐药性GH腺瘤提供新的理论依据。
    存在的问题、建议及其他需要说明的情况：（1）原代细胞转染效率较普通细胞低，拟调节转染增强剂的用量，增加转染效率；（2）过表达miR-524-5p 的原代细胞是否影响激素的分泌，造成下游蛋白的变化，从而影响相关实验结果，造成假阳性结果？进一步的对照验证实验正在进行中。（3）对MAPK/ERK 通路相关蛋白的检测应该包括qRT-PCR、Western Blot、通路抑制作用等步骤，相关实验正在进一步完善。
    项目取得成果的总体情况：已发表1 篇SCI 文章，共培养4 名博士研究生。