成果名称: 猪伪狂犬病病毒分子鉴别诊断试剂盒的研制及推广应用
完成单位: 广东省农业科学院动物卫生研究所
主要人员: 刘志成,沈海燕,张春红,张建峰,孙俊颖,董嘉文,李林林,魏文康,温肖会,邝瑞欢,梁秋慧
介绍:

    ①课题来源与背景:本课题来源:广东省科研计划项目,项目名称:猪伪狂犬病病毒分子鉴别诊断试剂盒的研制及推广应用,项目编号:2016A040403084。背景:2011以来,我国华北、华中、华南等地规模化猪场先后出现变异伪狂犬毒株导致的伪狂犬病爆发流行,部分猪场猪群野毒抗体阳性率高达100%,妊娠母猪35%出现流产,给我国生猪养猪业带来重大冲击。疫苗免疫接种仍是当前控制猪伪狂犬病的有效手段,当前我国共有4种PRV商品化弱毒疫苗(BarthaK-61株、Bucharest株、HB-98株,及SA215株)临床使用,其中BarthaK-61应用较广,但有报道该疫苗不足以防控该变异毒株。所以有必要建立配套的野毒与疫苗的鉴别诊断方法及不同基因型的快速区分方法。

    ②技术原理及性能指标:PCR-高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是一种简单、快速、低成本、高通量的PCR 扩增后检测技术,目前在该技术的基础上已经衍生出单核苷酸多态性分析(SNP)-HRM、小片段扩增(SA)-HRM、非标计探针(UP)-HRM、分子信标(MB)-HRM 等多种熔解曲线分析方法,尤其是分子信标(MB)-HRM 可以实现不同基因型高通量分型检测。多年来,本课题组通过和澳洲HRM技术成熟的科研机构合作,采用引进—消化吸收—再创新的模式已成功搭建动物疫病HRM 分子鉴别诊断分析平台,为本项目的实施提供了技术保障。

     ③技术的创造性与先进性:猪伪狂犬病毒由于其高GC 含量,进行病原分子诊断一直是较难克服的技术难题,本项目首次将熔解曲线分析技术应用于猪伪狂犬病毒的分型检测,在国外相对较成熟的HRM技术基础上创造性建立了基于探针法的熔解曲线分析技术。

    ④技术的成熟程度,适用范围和安全性:该技术目前处于实验室研发应用阶段,可适用于具有稳定SNP分型位点的疾病检测分型,应用到常规分子试剂及仪器,安全性较高。

    ⑤应用情况及存在的问题:目前项目研发诊断方法在临床试用阶段,需要加大临床使用数量,开展大范围验证工作。

    ⑥历年获奖情况:还未进行各类奖项申报。

批准登记号:
登记日期: 2019-03-25
研究起止时间: 2016-01-01至2018-12-31
所属行业: 农、林、牧、渔业
所属高新技术类别: 现代农业
评价单位名称: 广东省科学技术厅
评价日期: 2019-03-05