成果名称: Nisin替代抗生素用于水产高效生态养殖的关键技术研发
完成单位: 广州中国科学院先进技术研究所,深圳市澳华农牧有限公司
主要人员: 刘陈立,邓登,崔金明,蒙海林,何敬愉,蔡鑫,张齐,向朝林,杨金芳,廖英杰
介绍:

    本项目已建成华南地区最大的乳酸菌菌种资源库,共收集乳酸菌1638株,涵盖14个属,71个种或亚种。在此基础上对所筛选乳酸菌菌株进行抑菌实验分析,获得了23株对常见水产养殖致病菌(如副溶血弧菌、嗜水气单胞菌等)具有较好抑制效果的菌株,分离到了3种抗菌肽,且得到了NisA等3种Nisin同源基因。

    项目主要取得以下进展:(1)对珠江入海口的横门滩、淇澳岛、内伶仃岛等多处水域中常见水产鱼类进行样本采集,主要采集样本近30种(如跳跳鱼、鲻鱼、青口、花螺、青蟹等),采样后对其进行解剖,取其肠道粘膜用于筛选乳酸菌,最终分离得到各类乳酸菌共1638株。(2)建立了一套高通量筛选抑菌活性乳酸菌的方法,完成了菌库中全部乳酸菌对水产养殖业部分常见致病菌的抑制活性初步筛选:将乳酸菌培养液离心取上清,于96孔板中进行试验,来确定其对水产致病菌有抑制效果。主要使用的指示菌(致病菌)主要有:哈维弧菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、沙门氏菌、创伤弧菌、溶藻菌等。现已获得23株乳酸菌对上述指示菌具有广谱高效的抑制效果,为进行水产环保健康养殖产品的研发奠定了基础。(3)粗分5种抗菌肽,精细分离纯化了3种抗菌肽,对其活性及温度、酸碱、金属离子、有机溶剂、蛋白酶等耐受性进行了研究;通过设计并合成NisA等抗菌肽的简并引物、PCR扩增、电泳检测、pMD19-T载体连接、菌液测序等程序,获得了NisA等3种具有较强抑菌活性的Nisin同源基因。(4)对高产抗菌肽乳酸菌培养基进行了优化,试用了5种乳酸菌及其所产乳酸菌肽对南美白对虾进行拌料饲喂和攻毒测试。(5)建立了一套发酵中试平台,可发酵最大体积分别为5L和30L,在发酵过程中可以观察溶氧、调节pH值以及控制时间和温度。(6)通过与项目合作单位澳华集团进行联合研发,已对南美白对虾养成期间的前、中、后期三个不同生长阶段的营养需要参数进行研究。(7)已开发出一项针对乳酸菌发酵及其制剂生产的新工艺和一种针对对虾养殖的配合饲料产品。

批准登记号:
登记日期: 2019-06-12
研究起止时间: 2016-01-01至2017-12-31
所属行业: 农、林、牧、渔业
所属高新技术类别: 现代农业
评价单位名称: 广东省科学技术厅
评价日期: 2019-04-25