| 成果名称: | 鸭坦布苏病毒病快速诊断试剂盒的研制及流行病学研究 |
| 完成单位: | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
| 主要人员: | 孙敏华,胡奇林,董嘉文,李林林,袁建丰,邝瑞欢 |
| 介绍: | 鸭坦布苏病毒病,又称鸭黄病毒病、鸭出血性卵巢炎等,是我国2010年新出现的一种鸭、鹅传染病,主要威胁蛋鸭、蛋鹅。蛋鸭发病后,临床表现为体温升高,食欲明显下降,产蛋率急剧下降甚至绝产;剖检症状主要表现为卵泡出血、发育不良,部分鸭肠道出血及腹膜炎。该病发病率可达100%,死亡率为5%~30%。肉鸭也会发病,临床上主要表现为神经症状,死淘率为10%~30%;此外鸡也会发病。该病给我国养禽业造成了巨大损失。本项目获得广东省科学技术厅资助科研经费5万元,自有资金3万元,利用病毒分离、培养及序列分析等方法,建立了快速便捷的荧光PCR方法,开展了坦布苏病毒病流行病学及检测试剂盒的研制。 具体研究成果如下:1、通过设计多对针对鸭坦布苏病毒(DTMUV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)和减蛋下降综合征病毒(EDSV)的引物,从中筛选出了扩增效率高,特异性好的引物各1对,扩增片段分别为266bp,281bp和110bp。达到了在1个反应体系里同时可以检测出3种样品的要求,建立了三重荧光定量PCR方法。2、所建立的方法不与鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、番鸭呼肠孤病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒、新城疫病毒以及大肠杆菌的核酸发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对DTMUV的最低检出限为1.3个拷贝,对EDSV的最低检出限为80个拷贝,对H9亚型禽流感的最低检出限为48个拷贝;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。3、通过试剂优化,组装成简易试剂盒,对临床阳性鸭坦布苏病毒感染的泄殖腔拭子检出率为100%,对减蛋下降综合征病毒的阳性核酸检出率为100%,对H9 AIV阳性核酸检出率为100%。证实该方法灵敏可靠,其比普通PCR敏感10倍。保存期试验表明,该试剂盒在4度可保存6个月以上。 通过实验室研制和使用,获得了稳定的检测方法并组装了试剂盒。项目能够实现一次检测完成多个类似病原的检测,方便快捷,无环境污染,适用于临床样品的检测。目前技术的成熟度处于4级,能够获得稳定的测试结果。 |
| 批准登记号: | |
| 登记日期: | 2019-07-04 |
| 研究起止时间: | 2012-03-01至2014-12-31 |
| 所属行业: | 农、林、牧、渔业 |
| 所属高新技术类别: | 现代农业 |
| 评价单位名称: | 广东省科学技术厅 |
| 评价日期: | 2015-03-18 |
