1. 课题来源与背景： 1.1 课题来源 课题类型:广东省科技计划项目（地方计划） 课题来源单位：广东省科学技术厅 课题名称：实验猴非结核分枝杆菌感染特征与快速诊断研究 课题编号：2015A030302029 1.2 课题背景 非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria, NTM）是指除结核分枝杆菌复合群（M. tuberculosis complex, MTBC）和麻风分枝杆菌（M. leprae）以外的分枝杆菌。近几十年来，结核病的患病率大幅度下降，而NTM的感染和发病却有增无减，大多数NTM对主要抗结核药耐药，所以NTM的感染已成为一个临床上的重要课题。目前，我国还没有准确的NTM病流行病学资料，动物NTM病研究更是相对滞后，尚未发现关于非人灵长类NTM病的研究报道，显示出对这方面研究的不足。 此前，项目组建立的结核病恒河猴感染模型，收集到的大量临床样本，并且分离到NTM感染恒河猴病例，初步分析了非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌感染的差异，建立了良好研究基础。

     2. 技术原理及性能指标： 2.1 自然感染NTM病例感染特征 从结核菌素试验反应、临床症状、尸检、病理学及病原检测等方面，通过与MTB感染特征比较，获得NTM感染的特征，包括结核菌素试验阳性、无症状感染、类似MTB病理变化等特征。 2.2 血清学诊断标志物评价 项目收集到14例NTM病例，基于病例开展了MTB特异性抗原的血清学诊断评价，发现NTM与MTB交叉抗原，可用于区分NTM与MTB。 2.3 堪萨斯分枝杆菌感染模型及感染免疫研究 项目建立了食蟹猴堪萨斯分枝杆菌（Mycobacterium kansasii）感染模型，基于该动物疾病模型，开展了一系列的应用研究，包括免疫学诊断和多因子分析等。结合此前建立的结核病模型以及收集到的大量临床样本，分析了非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌感染免疫的差异，评价了实验猴非结核诊断方法的效能。该模型具有广泛的适用性，是研究NTM感染免疫的良好实验材料。 2.4 全血IFN-γ 释放试验评价 项目组还利用收集到的临床样本，评价了全血IFN-γ 释放试验在实验猴结核诊断中的应用价值，证实该方法敏感性和特异性均较高，可以成为实验猴结核诊断金标准（结核菌素试验）的有益补充。基于NTM与MTB的交叉抗原，可区分NTM与MTB感染。

    3. 技术的创造性与先进性 3.1 基于临床样本优势验证NTM诊断标志物 筛查自然感染NTM的实验猴，分析NTM感染和MTBC感染的输出差异，筛选适合血清学诊断、IFN-γ检测和分子生物学检测的高效诊断标志物，并建立相应快速诊断方法。 3.2 国内首次建立食蟹猴堪萨斯分枝杆菌感染模型 在国内首次建立了食蟹猴堪萨斯分枝杆菌（Mycobacterium kansasii）感染模型，基于该动物疾病模型，开展了一系列的原创性应用研究。

    4. 技术的成熟程度，适用范围和安全性 4.1 检测技术相对成熟 项目组长期从事实验猴结核病研究工作，在疾病诊断方面积累了大量的样本和成熟的技术，可以在本项目中转化应用和比较研究，有良好的技术保障。 4.2 适用范围 建立的检测技术适用于实验猴、野外猴、动物园观赏猴的NTM检测，合并MTB检测，可以快速检出重要的分枝杆菌病，降低传播风险。 受检样本可以是外周血、血浆及血清，也可以是组织、病料、鼻咽拭子等样本。 4.3 安全性 检测方法安全，但是考虑生物安全因素，样本处理、抽提等环节应在生物安全柜内操作，PCR电泳等操作宜在负压环境操作。

     5. 应用情况及存在的问题：指以及所存在的问题。 5.1 应用情况 建立的检测技术初步用于少量实验猴的检测，特异性较高。 5.2 国家标准未要求排除NTM,导致重视程度不够 由于国家标准GB14923.2未要求实验猴必须排除NTM，导致实验猴养殖机构对该病原的重视不够，疏于检测和控制，加之多数实验猴饲养场管理人员担心影响销售，不愿对外泄露本场的检疫信息，导致阳性病例长期存在群体中并不断传播。 5.3 实验猴分枝杆菌快速诊断研究仍需持续开展 尽管目前实验猴的生产管理有了非常大的改善，基本实现了生产繁育的相对封闭，使得外源性疾病减少，但是MTB、NTM的感染始终没有根除，并且一直威胁着实验猴。所以，对实验猴分枝杆菌快速诊断的研究需要持续开展。建议有关部门继续给予支持，以使该研究继续深入和推广应用。