“五种禽垂直传播疫病液相芯片高通量检测体系的建立与应用”来源广东省技术交易体系与科技服务网络建设领域科技计划项目（项目编号：2014A040401048）。液相芯片检测，也称为微球体悬浮芯片检测(suspension array)、多重荧光免疫检测 (Multiplexed Flourometric Immunoassay，MFIA)，是基于xMAP (Multiplex Analyte Profiling) 技术的新型生物芯片技术平台。是继基因芯片、蛋白芯片之后的新一代高通量分子检测技术平台。与传统ELISA检测方法比较，该技术具有灵敏度高、成本低廉、样品用量少、高通量检测等突出优点。本项目通过与美国Charles river公司合作，采用技术引进、消化吸收的模式，成功搭建多重荧光免疫检测技术开发平台（MFIA），以种禽场重点监测的五种禽垂直传播疫病为研究对象，研究多重免疫荧光技术的关键技术环节，开发出针对五种禽垂直传播疫病的多重检测方法。项目建立的方法为SPF禽场疫病监测和种禽场抗体监测提供重要技术支持。项目主要完成下述工作：

    （1）五种病毒表面抗原的克隆、表达和纯化。采用分子生物学技术完成五个抗原基因的克隆，构建原核表达载体，诱导表达并纯化出五种表面抗原重组蛋白。

    （2）多重荧光免疫反应检测方法的建立与优化。用五种抗原分别与标记不同荧光的磁珠进行偶联，优化偶联条件并进行偶联确认；以五种偶联磁珠为基础，建立单体系液相芯片检测方法；将五种偶联磁珠按比例混合，建立液相芯片多重检测方法，对液相芯片多重检测反应体系的缓冲液的成分，抗体的浓度，增强剂和抗抑制剂的添加，抗原的选择等进行研究，针对性地优化重组蛋白的浓度，生物素标记二抗的浓度，藻红蛋白标记链霉亲和素的浓度以及生物素标记二抗和藻红蛋白标记链霉亲和素作用时间等条件，开发出适用五种病原的液相芯片检测体系，验证特异性、灵敏度和重复性。建立了五种病原微生物多重荧光检测技术平台，为研究成果产业化奠定基础。

    （3）多重荧光免疫检测体系的应用。将已建立的多重荧光免疫检测体系应用于种禽场。

    （4）项目申请国家发明专利一项，并获得授权。建立的多重检测方法应用于临床检测，对促进高通量诊断技术的科技成果转化，提升高通量诊断试剂盒技术的产业化水平及竞争力有重大创新意义。