①课题来源与背景:番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus, MDPV) 和鹅细小病毒( goose parvovirus, GPV)是两种水禽烈性传染病，分别能引起番鸭细小病毒病和小鹅瘟。目前，这两种疾病是番鸭饲养业中危害较为严重的传染病，严重影响了养鸭业的发展。这两种疫病所表现的流行病学、临床症状、病理变化类似，临床上常在同一地区流行，甚至混合感染，临床上很难做到鉴别诊断。MDPV和GPV两种病毒粒子的理化特性、形态结构非常相似，因此很难通过显微观察将这两种病毒鉴别区分开来。其基因组同源性达81. 9 %，氨基酸同源性达到88. 96 %，其中结构蛋白VP1的同源性达87. 57 % ，从而决定了它们在抗原性上的高度同源，同时也使这两种病毒的抗血清之间存在交叉保护性。所以，在乳胶凝集试验、琼脂扩散试验、荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等常规的血清学检测方法中，只有应用MDPV 和GPV 单克隆抗体才能将这两种病毒区分开来。这无疑提高了鉴别的成本和操作复杂性。虽然国内的许多学者已经针对MDPV和GPV基因组分别设计特异性的引物，建立了鉴别MDPV和GPV的PCR检测技术，但是该方法通常需要设计2对特异性的引物，而且判定结果需要进行凝胶电泳，所以该方法在进行高通量的检测任务时会显得费时费力。

    ②技术原理及性能指标：高分辨率熔解曲线分析技术（ High Resolution Melting ），简称 HRM ，其技术原理主要是基于核酸分子物理性质的不同：不同核酸分子的片段长短、 GC 含量、 GC 分布等是不同的，因此任何双链 DNA 分子在加热变性时都会有自己熔解曲线的形状和位置。 HRM 技术的基本原理就是根据熔解曲线的不同来对样品来进行区分。

     ③技术的创造性与先进性：通过分析MDPV和GPV 基因组，在VP3基因中找出了一段相对保守序列，针对该序列设计了一对既能扩增MDPV又能扩增GPV的通用引物，利用该引物对MDPV和GPV DNA进行PCR扩增，然后通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，采集荧光数据，根据两者熔解曲线的不同来鉴别MDPV和GPV。

    ④技术的成熟程度，适用范围和安全性：目前，PCR-HRM 技术在禽类病毒检测方面已有报道，国内外的学者研究建立了A型流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、禽腺病毒、禽白血病病毒、鸡支原体病毒和鸡传染性囊病病毒等方面的PCR-HRM检测方法。PCR-HRM方法无需进行凝胶电泳，安全性好。

    ⑤应用情况及存在的问题：用PCR-HRM方法对广东省和福建省收集到的临床样品进行检测，12份为阳性样品，其中2份为MPDV阳性样本，2份为GPV阳性样本，和8份为变异样本。实验室试验效果良好。

    ⑥历年获奖情况：参与获得广东省农业技术推广奖三等奖。