①课题来源与背景：本课题来源：广东省科研计划项目，项目名称：基于熔解曲线分析技术的猪流行性腹泻病毒不同基因型鉴别诊断方法的建立及应用，项目编号：2016A040403085。背景：猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea, PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的以腹泻、呕吐和脱水为典型特征的一种急性高度接触性肠道传染病。由于疫苗的广泛使用（中国：CV777；韩国KPED-9；日本：P-5V；美国：PEDv），通过抗体检测很难确定猪群的实际感染情况，加之该病病原难以分离培养，因此对病原的分子检测便成为评估该病流行、发生态势及生物安全防控的主要手段。虽然PEDV所有分离株都呈单一血清型，但其主要抗原表位基因（纤突糖蛋白S基因）却呈现不同区域特征，这其中以中国流行毒株多样性尤为明显（我国北方毒株与韩国新发毒株相近、我国部分毒株与美洲株相近、我国南方部分毒株与泰国等东南亚国家毒株相近）。由于弱毒疫苗的广泛使用（中国、韩国、日本），临床很难将疫苗毒排毒与野毒感染进行区别（我国目前使用的疫苗毒虽然ORF3有部分缺失，可以作为PCR鉴别标记，但也存在韩国KPEDV-9在中国部分地区非法使用的情况，KPED-9无ORF3缺失），更无法对流行的基因型进行鉴定。

    ②技术原理及性能指标：PCR-高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是一种简单、快速、低成本、高通量的PCR扩增后检测技术，目前在该技术的基础上已经衍生出单核苷酸多态性分析(SNP)-HRM、小片段扩增（SA） -HRM、非标计探针（UP）-HRM、分子信标（MB）-HRM 等多种熔解曲线分析方法，尤其是分子信标（MB）-HRM 可以实现不同基因型高通量分型检测。多年来，本课题组通过和澳洲HRM技术成熟的科研机构合作 ，采用引进—消化吸收—再创新的模式已成功搭建动物疫病HRM 分子鉴别诊断分析平台，为本项目的实施提供了技术保障。

     ③技术的创造性与先进性：本研究以主要抗原表位基因S基因全长遗传进化关系为基础，对PEDV首先进行了基因型划分，随后对此4种不同基因型PEDV全长基因组进行了系统比对，优先寻找稳定的SNP位点以筛选探针，获得探针信息后，再从其上下游保守区域设计引物，最后还要对此引物扩增效率进行评价，严格杜绝非特异性扩增、引物二聚体等。经过大量筛选、尝试，最终获得了一对特异性引物及一条符合条件的水解探针。本项目首次将熔解曲线分析技术应用于PEDV的分型检测，在国外相对较成熟的HRM技术基础上创造性建立了基于探针法的熔解曲线分析技术。

    ④技术的成熟程度，适用范围和安全性：该技术目前处于实验室研发应用阶段，可适用于具有稳定SNP分型位点的疾病检测分型，应用到常规分子试剂及仪器，安全性较高。

    ⑤应用情况及存在的问题：目前项目研发诊断方法在临床试用阶段，需要加大临床使用数量，开展大范围验证工作。

    ⑥历年获奖情况：还未进行各类奖项申报。