成果名称: 基于熔解曲线分析技术的猪乙型脑炎病毒不同基因型鉴别诊断方法的建立及应用推广
完成单位: 广东省农业科学院动物卫生研究所
主要人员: 刘志成,孙俊颖,张春红,沈海燕,魏文康,张建峰,温肖会,瞿云芝
介绍:

    ①课题来源与背景:本课题来源:广东省科研计划项目,项目名称:基于熔解曲线分析技术的猪乙型脑炎病毒不同基因型鉴别诊断方法的建立及应用推广,项目编号:2015A030401066028。背景:根据JEV结构基因的进化分析,JEV包含5个基因型(I、II、III、IV和V),各基因型的分布有一定的区域性。包括中国在内的亚洲目前主要流行I型和III型,II型主要从泰国、马来西亚、澳大利亚、印度尼西亚分离得到,IV和V分布较少,主要来源于印度尼西亚和马来西亚。对 JEV进行基因型分析是了解JEV遗传变异、开展分子流行病学研究的基础,为分析JEV 流行株的遗传变异、基因型以及与现行使用的疫苗株之间的差异等提供了科学依据。目前对 JEV进行基因型分析主要依靠测序后的序列进化分析,其过程复杂且费用较高,因此需要一种快速、简便的方法用于基因型鉴定。而活疫苗的使用也给临床JEV感染的检测带来干扰,因此建立一种疫苗株与野毒株的鉴别检测方法具有重要意义。

    ②技术原理及性能指标:PCR-高分辨熔解曲线分析技术(HRM)是一种简单、快速、低成本、高通量的PCR扩增后检测技术,目前在该技术的基础上已经衍生出单核苷酸多态性分析(SNP)-HRM、小片段扩增(SA) -HRM、非标计探针(UP)-HRM、分子信标(MB)-HRM 等多种熔解曲线分析方法,尤其是分子信标(MB)-HRM 可以实现不同基因型高通量分型检测。多年来,本课题组通过和澳洲HRM技术成熟的科研机构合作 ,采用引进—消化吸收—再创新的模式已成功搭建动物疫病HRM 分子鉴别诊断分析平台,为本项目的实施提供了技术保障。

    ③技术的创造性与先进性:猪乙型脑炎是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)经媒介蚊虫传播的一种人兽共患病。本病猪群的自然感染率高,且病毒血症持续时间长,所以猪是JEV主要的扩散和增殖宿主。JEV感染在临床上多以母猪发生流产、死胎、木乃伊胎,公猪发生睾丸炎、不育为特征,给养猪业造成巨大损失。由于目前尚无有效的治疗方案,接种疫苗仍然是预防该疾病流行的最有效方式。本项目首次将熔解曲线分析技术应用于JEV的分型检测,在国外相对较成熟的HRM技术基础上创造性建立了基于探针法的熔解曲线分析技术。

    ④技术的成熟程度,适用范围和安全性:该技术目前处于实验室研发应用阶段,可适用于具有稳定SNP分型位点的疾病检测分型,应用到常规分子试剂及仪器,安全性较高。

     ⑤应用情况及存在的问题:目前项目研发诊断方法在临床试用阶段,需要加大临床使用数量,开展大范围验证工作。

    ⑥历年获奖情况:还未进行各类奖项申报。

批准登记号:
登记日期: 2020-08-12
研究起止时间: 2017-01-01至2019-12-31
所属行业: 农、林、牧、渔业
所属高新技术类别: 现代农业
评价单位名称: 广东省科学技术厅
评价日期: 2020-05-25