一、课题来源与背景： 猪伪狂犬病是有猪伪狂犬病毒（PRV）引起的猪和多种动物一种急性传染病，临床上表现发热、奇痒、脑脊髓炎为特征。对猪危害最为严重，能导致妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎、新生仔猪神经症状和死亡率升高、生长育肥猪呼吸障碍等症状。 我国从90年代以来通过大面积接种Battha-K61疫苗，取得了卓越的防控效果。但是自从2011年至今，PRV又在国内免疫猪群中暴发。据报道，引起大面积感染猪伪狂犬病的主要原因是由于猪伪狂犬病毒发生了变异导致病毒毒力增强，使得传统的Battha-K61毒株的疫苗没有能够提供较好的保护。疫情的暴发给我们提出一系列新的问题：病毒分子水平变异情况和程度如何？如何鉴别诊断变异毒株？现有疫苗保护力如何，是否需要更新？提高Battha-K61毒株疫苗的抗原含量是否可以抵御变异毒株的感染？转阳的猪场是否还能净化？ 针对以上问题，我们迫切需要对猪伪狂犬变异毒株进行生物学特性、分子特征和免疫原性研究，建立猪伪狂犬病变异毒株的快速诊断方法，探索猪伪狂犬病免疫方案（包括疫苗的选择、最佳免疫时间、最佳免疫剂量等），研究猪伪狂犬防控关键点，最后制订一套完善综合防控方案。

     二、技术原理及性能指标： 1、建立的PR 双重PCR 检测方法可有效区分PRV 野毒和疫苗毒，且不与PPV、PRRSV、PCV2 反应，具有很强的特异性，可检测到1.432pg/μL PRV 野毒DNA，重复性很好。该方法可用于临床PRV 的快速检测，以及PRV 野毒和疫苗毒的鉴别诊断，在PRV 的根除过程中将发挥一定作用。 2、建立了猪伪狂犬病的交叉等温扩增-侧流层析检测方法，该方法的最低检测限为20 TCID50，与PCR方法的敏感性相同，该技术实现结果的可视化判定，预期研制可满足兽医基层需求的新型可视化快速检测试剂盒。 3、开展了猪伪狂犬病免疫方案的研究 1）疫苗的选择：采用qPCR和TCID50方法测定疫苗抗原含量，摸索抗原含量和免疫效果的相关性；通过血清抗体中和指数和攻毒保护试验对不同毒株、抗原 含量和不同佐剂的疫苗免疫原性和保护力进行评价；通过细胞因子相关基因mRNA转录蛋白分泌水平的测定分析疫苗细胞免疫效果。2）最佳免疫时机的确定：根据不同病毒感染压力和抗体之间的相关性分析，确定疫苗免疫最佳时机。3）最佳免疫剂量的确定：通过血清抗体中和指数，免疫后攻毒病毒血症和排毒量等确定精准的免疫剂量。 4）免疫途径的摸索：通过筛选新型粘膜免疫佐剂和免疫途径（如滴鼻）和常规的肌肉注射免疫途径比较，选择合适的免疫途径。

    三、技术的创造性与先进性： 1、建立了猪伪狂犬病的交叉等温扩增-侧流层析检测方法，该方法的最低检测限为20 TCID50，与PCR方法的敏感性相同，该技术实现结果的可视化判定，预期研制可满足兽医基层需求的新型可视化快速检测试剂盒。 2、筛选了不同疫苗佐剂，其中纳米佐剂灭活疫苗免疫效果最好，同时PRV-WH-ΔgI/gE灭活疫苗最佳免疫剂量107.0 TCID50/头份。

    四、技术的成熟程度，适用范围和安全性： 1、猪链球菌检测技术方法属于相对成熟阶段，可以通过市场大批量进行验证。 2、猪伪狂犬病免疫方案较为成熟，可以应用到养猪场生产当中。

    五、应用情况及存在的问题： 1、猪伪狂犬病免疫方案已经在示范场应用，并取得较好的效果，可以用于扩大推广。 2、研制的PRV-WH-ΔgI/gE灭活疫苗处于实验室阶段，需要寻找合作单位共同开发完善。