1. 课题来源与背景： 本项目受广东省科学技术厅-农村科技领域项目资助，项目名称为：“利用减毒沙门氏菌同时投递口蹄疫DNA疫苗与shRNA新型制剂的研究”项目（项目编号：2016A020210050）。

     2 技术原理与性能指标： 主要针对口蹄疫传统灭活疫苗存在诸多缺点：保护性抗体产生时间慢、抗体水平低、维持时间短、不能有效的激发细胞免疫和粘膜免疫、免疫副反应大及疫苗毒株更新滞后等，实际应用效果不理想。在我国，口蹄疫疫情一旦发现，立即扑杀。虽然如此，口蹄疫病毒在偶蹄动物上还存在潜伏感染和隐性感染况，牛可带毒20天，猪可带毒5天。现有的口蹄疫疫苗并不能处理隐性带毒的情况。 综合应用RNA 干扰技术、核酸疫苗技术、沙门氏菌活载体疫苗技术，利用减毒沙门氏菌载体共表达口蹄疫病毒RNAi及主要保护性抗原基因，进行新型基因工程疫苗的研究。shRNA的RNA 干扰可以突破血清型的壁垒，解决传统疫苗免疫血清型不能交叉保护的问题，为FMDV的防治提供了新的思路；核酸疫苗可有效的激活细胞免疫；减毒鼠伤寒沙门氏菌载体具有能够激发宿主产生针对所携带外源抗原的特异性免疫应答，增强粘膜免疫、细胞免疫的功能，制备简单，易于储存和运输，抗原无需提纯、生产成本低廉等优点。本研究筛选抑制口蹄疫病毒的shRNA、克隆口蹄疫病毒P1基因，分别插入双启动子沙门氏菌表达载体，在细胞上检测shRNA干扰作用和P1基因表达水平；再转入减毒沙门氏菌，免疫动物，检测细胞及体液免疫。

    3 技术的创造性与先进性： 本项目将RNAi 与DNA 疫苗相结合，旨在研究出一种能突破血清壁垒，具有激发体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，对清除各型口蹄疫病毒的潜伏和隐性感染意义重大。

     4 技术的成熟度及应用范围和安全性： 申请者及其研究团队长期从事猪猪口蹄疫流行病学调查及综合防控技术研究，熟练掌握该病研究过程中的各项试验技术操作，技术成熟。口蹄疫疫苗免疫属于国家强制免疫动物疫病，试用于各猪、牛、羊养殖场，核心技术不涉及活毒，没有泄毒风险，安全性良好。

    5 应用情况及存在问题： 本研究已在实验室小规模应用，不存在显著问题。

    6 历年获奖情况： 项目执行期间，项目部分内容参与广东省科学技术奖评定，“猪口蹄疫综合防治技术”获2016年广东省科技进步二等奖；“华南地区猪口蹄疫免疫方案的推广与应用”获2017年广东省农业推广二等奖；发表论文4篇，提交科技报告1份，申请发明专利1项：一种抗口蹄疫病毒感染的四联miRNA 及构建方法（申请号：201810086771.5）已按计划完成合同规定的内容。