①课题来源与背景； 课题来源于中山市社会公益科技项目。 我国很多食品没有菌落总数限量规定，耐药性可通过数量庞大共生菌“转基因”至人肠道非耐药株，这种模式放大了耐药性流行和危害程度。本研究计划探讨即食食品耐药性传播规律，不仅有助于食物链耐药性风险评估以及传播规律研究，也为更多食品安全标准限量制订奠定了基础，项目所建立耐药基因快速分子检测平台，也可为临床和兽医用药提供及时准确的用药指导。 虽然细菌耐药性已引起全球极大关注，但中国知网等搜索显示，我国对食品中的耐药性调查很少，特别是非致病菌耐药性研究就更少。但食品中非致病菌数量庞大，如市售快餐中检测不到致病菌，但菌落总数却达33万CFI/g。国外研究证明，共生菌传递的耐药基因远远超过致病菌，国际食品法典委员因此建议删除食品中菌落总数指标，但将耐药性检测结果作为食品安全判定标准，我国已逐步删除菌落总数这一限量标准，但即食食品耐药性限量设定相关基础研究几乎空白。目前对于细菌耐药性筛查，主要是通过分离培养后药敏试验进行，这些方法存在检测周期长，容易漏检等缺点。但耐药基因检测快速简便，结果准确，微生物及时、针对性用药具有重要参考意义。 项目承担单位曾主持课题《水产品重要病原体分子检测技术研究》（2010GDK057）研究并取得重要突破。2013年1月，经广东出入境检验检疫局组织开展科技成果鉴定，认为该项目研究整体达到国际先进水平，其中四项创新点为国内外首创。共发表SCI论文6篇，申请国家发明专利4项。该项目获中山市2013年度科技进步奖一等奖(2012-1B-1-09)。项目组主要参加成员作为国家质检总局WTO/SPS通报评议专家，长期从事食品安全相关国际技术贸易措施贸易措施通报评议工作，已收整理了大量关于食品微生物耐药性相关条款，对干课题开展且有重要指导音义。项目依托单位不仅承担从事进出口食品安全技术把关重任，而且已连续四年为中山市餐饮和流通环节提供食品安全检测技术服务，课题组利用这些难得机会已经完成中山市范围自制饮料、快餐、凉拌菜、生食海产品等即食食品中进行耐药菌分离和药敏分析工作，共分离获得耐药菌共15种89株。

    ②技术原理及性能指标； 根据以往发布的公开文献，筛选并确定各类食品中主要耐药基因如四环素耐药基因（tetA、tetB、tetC、tetK、tetL、tetM、tetS），磺胺甲基异噁唑耐药基因（sulI、sulII）和甲氧苄氨嘧啶耐药基因（dfrA1~dfrA12）等耐药基因，进行引物设计，建立耐药基因点突变高分辨率熔解曲线分析（HRMA）检测方法，建立可移动耐药基因和遗传元件（整合子，转座子等）real time PCR检测方法，对反应体系进行优化，构建阳性质控标准品。

    ③技术的创造性与先进性； 将高分辨率熔解曲线分析（HRMA）技术应用于耐药基因点突变检测，将real time PCR 方法于获得性耐药基因和可移动遗传元件（整合子，转座子等）的检测，克服普通PCR 方法操作繁琐，易污染的缺点。 利用 real time PCR 方法的高灵敏度，尝试不经细菌分离，直接开展耐药基因检测的方法，使检测周期由两周缩短为1天。

    ④技术的成熟程度，适用范围和安全性； 项目建立食品中耐药菌主要耐药基因7种分子检测方法，并开展分子流行病学调查。通过本项研究，在现代食品物上发表论文1篇，申请国家发明专利4项，实用新型专利7项。通过本项研究，提供了广东省范围内即食食品中耐药菌种类，耐药性水平和耐药基因流行情况的数据为食源性耐药基因船体风险评估以及耐药性控制奠定坚实基础。所提供的检验技术规范为临床和兽用抗生素针对性用药提供快速。可靠的预测结果。

     ⑤应用情况及存在的问题； 项目方法以及取得的专利在应用中都得到了良好的反馈。

    ⑥历年获奖情况； 无