本研究拟在前期良好的科研工作基础上，采用强-强联合的方式，与广东某畜牧兽医研究院有限公司、某高校及粤西地区某猪场共同研制并开发一种新型、高效的PRV-gE基因缺失的变异株疫苗，为我国伪狂犬的防控提供技术支持。 研究内容如下：

    （1）病原学检测：对PRV免疫失败猪场中的发病猪病进行剖解、采集（扁桃体、脑）病料，进行病原的检测及病毒的分离鉴定。

    （2）血清学监测：对广东不同地区猪群的伪狂犬野毒抗体进行监测，了解伪狂犬野毒感染的情况； （3） PRV分子流行病学调查。 PCR检测PRV gE基因，同时分段扩增、拼接PRV gB基因，经分析了解广东地区伪狂犬野毒的遗传变异规律，同时进行抗原性分析。

    （3）拟分离病毒的动物毒力试验。应用靶动物及非靶动物进行动物实验，观察、检验筛选的病毒对动物的致病性，剖解进行组织学分析；病毒的分离与纯化。对进行回归实验的动物病料进行病毒分离与鉴定，采用敏感细胞系VERO分 离病毒，并进行纯化和鉴定。

    （4） PRV gE基因缺失毒的构建。分别构建gE基因同源臂质粒，线性化后，转染VERO细胞，对感染性克隆进行抗逆或营养缺陷筛选，对gE缺失的重组PRV病毒进行纯化筛选。

    （5）重组病毒生物学特性研究。重组病毒的动物实验，分析 PRV 弱毒的毒性和感染能力等。

    （6） PRV 灭活苗试制。对筛选的 PRV 病毒进行大规模细胞培养，灭活后与非特异的 T 细胞激活剂进行配制，制备 PRV 灭活疫苗。

    （7）新型疫苗的安全及效力实验。按照新兽药证书相关的申报规定，对比商品化疫苗和本项目制备疫苗进行相关的安全性、免疫效力等试验研究。

    （8）疫苗的临床应用： 5 批中试产品约 20000 头份灭活疫苗的区域试验。在广东粤西地区如茂名、化州、清远等地选择不同养殖模式的规模化猪场进行疫苗中试产品区域试验。收集区域试验数据结果， 进行比对分析和差异显著性统计，评定灭活疫苗的免疫效果。

    （9）疫苗对不同免疫途径的免疫效果分析及免疫程序的制定。针对不同的免疫途径，制定合理的免疫程序。

    （10）实验数据的综合分析、专利申报和临床资料整理。