| 成果名称: | 益气除痰方调控内质网应激与UPR促肺癌细胞凋亡的研究 |
| 完成单位: | 广州中医药大学、中山大学 |
| 主要人员: | 林丽珠、项辉、曹洋、翟林柱、孙玲玲、郑心婷、李元滨、杨文静、方若鸣、张景涛 |
| 介绍: | 1.课题来源与背景：本项目来源于国家自然科学基金《益气除痰方调控内质网应激与UPR促肺癌细胞凋亡的研究》。调控内质网应激与未折叠蛋白反应（UPR）诱导肿瘤细胞凋亡是当前国内外肿瘤治疗的研究热点，但中药复方调控内质网应激与UPR抗癌的研究很少涉及。"痰、虚"是肺癌的主要病机，治疗肺癌须健脾益气，除痰散结。"益气除痰方"是经长期临床研究证实治疗肺癌的有效方剂。前期研究表明该方可明显诱导肺癌细胞凋亡，以蛋白质组学研究发现"益气除痰方"可下调UPR相关蛋白质折叠所需的多个分子伴侣表达，增强内质网应激，提示该方可能通过调控内质网应激及UPR诱导细胞凋亡治疗肺癌。 2.研究目的与意义：本研究从内质网应激、UPR（蛋白质合成、折叠、降解）、内质网应激凋亡通路三方面深入探讨"益气除痰方"对"内质网应激反应"这一相对独立完整的信号通路网络的干预机制，阐明其抗肺癌的机理；并采用siRNA等技术反向验证该方诱导细胞凋亡的作用靶点。本研究符合中医"整体观念"和中药"整体调节"的特点，将为中药复方"整体调节"优势提供新的理论依据。 3.主要论点与论据：本研究首先通过体内研究部分，以前期研究已建立的A549肺腺癌种植瘤裸鼠模型为研究对象，通过观察给药后裸鼠的一般情况、肿瘤生长情况、生存时间、荷瘤裸鼠肺转移结节个数，以及应用免疫组化检测瘤体组织内质网应激及凋亡相关各蛋白表达，证实了益气除痰方对A549细胞种植裸鼠的肿瘤具有抑制作用，其作用机制与内质网应激凋亡与未折叠蛋白相关；其次，通过MTT、流式细胞技术检测证实，益气除痰方可促进A549肺腺癌细胞凋亡及抑制增殖，且益气除痰方可通过下调GRP78、P4HB、PDIA3等分子伴侣，激活未折叠蛋白反应中PERK-eIF2α信号通路；应用RT-PCR检测Caspase-4基因在A549细胞中的表达水平，并通过化学抑制剂Z-LEVD-FMK抑制后，可证实益气除痰方可通过上调Caspase-4的表达促进A549细胞的凋亡，但并非唯一途径，我们推测益气除痰方诱导细胞凋亡除Caspase-4途径外，尚包含其它信号通路参与；最后，通过Western blot，RT-PCR等方法检测证实，益气除痰方可明显提高A549细胞CHOP蛋白及 mRNA表达，可通过下调bcl-2，上调Bax mRNA表达以促进A549细胞凋亡，并通过构建CHOP siRNA质粒并转染A549细胞，沉默CHOP基因的表达，观察到益气除痰方上调CHOP能力下降，促进细胞凋亡能力减弱，明确益气除痰方通过CHOP、Caspase-4共调控A549细胞凋亡。通过以上实验明确益气除痰方可激活内质网应激凋亡信号通路促进肿瘤细胞凋亡，证实中医药治疗肿瘤多为多靶点治疗 4.创见与创新：本研究明确了益气除痰方可激活内质网应激凋亡信号通路促进肿瘤细胞凋亡，其作用靶点主要是共调控CHOP、caspase-4以诱导A549细胞内质网应激反应性凋亡。 5.社会经济效益：本项目的研究结果，为中药在肺癌治疗中的应用提供了科学依据，益气除痰方在临床中提高患者生存质量，并具有良好的经济效用比。相关的复方药物已经进行标准化研究，开发为院内制剂，适合推广应用于晚期肺癌。 |
| 批准登记号: | 粤科成登（2）字【2017】0293 |
| 登记日期: | 2017-09-22 |
| 研究起止时间: | 2013.01 至2016.12 |
| 所属行业: | 卫生和社会工作 |
| 所属高新技术类别: | |
| 评价单位名称: | 国家自然科学基金委医学科学部 |
| 评价日期: | 2017.03.10 |
